Resumo Neospora caninum é um parasita Apicomplexa relacionado a abortos no gado bovino, que resultam em impactos econômicos. Não há tratamento comercial para neosporosis e o reposicionamento de drogas indica uma estratégia rápida para testar candidatos anti-N. caninum. Neste artigo, são descritos os efeitos da atovaquona, cloroquina, quinino, primaquine e tetraciclina na proliferação de N. caninum. As concentrações IC50 em N. caninum foram comparadas com a informação disponível, baseada em estudos publicados previamente para Plasmodium e Toxoplasma gondii, incluindo a correlação com os mecanismos de ação descritos para cada droga testada. Os padrões de inibição indicam pontos de similaridades e diferenças entre N. caninum, Plasmodium e T. gondii. Por exemplo, a atovaquona demonstra uma alta atividade antiparasitária em todos os modelos testados, enquanto a cloroquina não inibe N. caninum. Por outro lado, a tetraciclina é efetiva contra Plasmodium e N. caninum, em contraste com a baixa atividade em modelos de T. gondii. O reposicionamento de drogas antimaláricas em N. caninum é uma forma rápida e de baixo custo para o desenvolvimento de novas formulações que usam compostos bem estabelecidos.

Abstract Neospora caninum is an apicomplexan parasite that causes abortion in cattle, resulting in significant economic losses. There is no commercial treatment for neosporosis, and drug repositioning is a fast strategy to test possible candidates against N. caninum. In this article, we describe the effects of atovaquone, chloroquine, quinine, primaquine and tetracycline on N. caninum proliferation. The IC50 concentrations in N. caninum were compared to the current information based on previous studies for Plasmodium and Toxoplasma gondii, correlating to the described mechanisms of action of each tested drug. The inhibitory patterns indicate similarities and differences among N. caninum, Plasmodium and T. gondii. For example, atovaquone demonstrates high antiparasitic activity in all the analyzed models, while chloroquine does not inhibit N. caninum. On the other hand, tetracycline is effective against Plasmodium and N. caninum, despite its low activity in T. gondii models. The repurposing of antimalarial drugs in N. caninum is a fast and inexpensive way to develop novel formulations using well-established compounds.

Neospora caninum, parasita do filo Apicomplexa, é causador da neosporose, doença responsável por perdas econômicas importantes na pecuária. Um fator comum entre os apicomplexas é o processo de invasão majoritariamente dirigido pelo parasita. Dentre as primeiras avaliações de moléculas candidatas, que possivelmente interferem no processo de invasão, o ensaio de invasão in vitro é um meio rápido e direto de selecionar futuros agonistas ou antagonistas. Este trabalho desenvolveu um novo ELISA baseado em cultura (Cell-culture ELISA) e um ensaio que mede a atividade transiente de β-galactosidase, aplicados para a detecção semiquantitativa de N. caninum em células Vero. Cell-culture ELISA é baseado em histoquímica e imunologia, resultando em uma reação colorimétrica. A atividade da β-galactosidase foi obtida pela transfecção transiente do gene LacZ sob controle do promotor RPS13 de N. caninum. Esses métodos avaliaram os efeitos da temperatura (37°C e 85°C) sobre a invasão e adesão. Os três métodos testados (real time PCR, atividade de β-galactosidase e ELISA) mostraram um padrão similar, indicando que diferentes métodos podem ser complementares. Adicionalmente, esse ELISA é adequado para aplicação em laboratórios carentes de uma complexa estrutura para métodos de detecção moleculares.

Neospora caninum belongs to the phylum Apicomplexa, the causative agent of neosporosis, which leads to economic impacts on cattle production. A common feature among apicomplexan parasites is the invasive process driven mostly by the parasite. As a first evaluation of candidate molecules that play a possible role by interfering in this invasive process, the in vitro invasion assay is a fast and direct way to screen future agonists or antagonists. This work involved the development of a new cell culture ELISA and transient β-galactosidase activity applied to the semi-quantitative detection of N. caninum in Vero cell culture. Cell culture ELISA is based on histochemistry and immunology, resulting in a colorimetric reaction. The β-galactosidase activity was obtained by the transient transfection of the lacZ gene under control of RPS13 promoter of N. caninum. These methods were used to evaluate the effects of temperature (37°C and 85°C) on the invasion and adhesion of tachyzoites. The three tested methods (real time PCR, β-galactosidase activity and ELISA) showed a similar pattern, indicating that different methods may be complementary.